点击数:31652017/3/16 13:01:14 来源: 海瑞正检测
央视3·15晚会,是广大消费者信赖的舆论阵地,也是维护消费者权益的代名词。今年3.15有关食品安全的话题,依然是晚会关注的重点。喹乙醇成功“中标”,把饲料兽药残留和企业滥用非法添加剂问题推向了风口浪尖。
喹乙醇、硫酸黏菌素、硫酸新霉素、磺胺喹噁啉、二氢吡啶,这些生僻名字的出现,也给我们一个普及食品安全知识的机会,下边着重介绍一下喹乙醇:
喹乙醇,喹乙醇又称喹酰胺醇,商品名为倍育诺、快育灵,由于喹乙醇有中度至明显的蓄积毒性,对大多数动物有明显的致畸作用,对人也有潜在的三致性,即致畸形,致突变,致癌。因此喹乙醇在美国和欧盟都被禁止用作饲料添加剂。我国2005年版《兽药典》以及《饲料药物添加剂使用规范》也都明确规定,喹乙醇适用范围:35公斤以下的猪,禁用于禽、禁用于体重超过35kg的猪、休药期35天。
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广告完毕,下面普及一下检测知识,给大家介绍一下饲料中喹乙醇的检测方法:
饲料中喹乙醇的测定
1、标准依据
《农业部2086号公告-5-2014 饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇的测定 液相色谱-串联质谱法》
2、适用范围
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇含量的测定 。
本方法检测的4种药物在配合饲料和浓缩伺料中检测限均为 0. 06 mg/kg,定量限均为 0. 20 mg/ kg;精料补充料和添加剂预混合饲料中检测限均为 0. 15 mg/kg,定量限均为 0. 40 mg/kg。
3、方法原理
采用乙腈和甲酸溶液提取试料中的卡巴氧、乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇,经 HLB固相萃取柱净化后液相色谱一串联质谱法测定,基质匹配标准曲线校正,外标法定量 。
4、仪器与试剂材料
试剂:
色谱纯:甲醇、乙腈、甲酸、盐酸、二甲亚砜、磷酸二氢钾。
6mL HLB固相萃取柱
喹乙醇标品:纯度>97.0%
仪器:
液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源;
分析天平;离心机;固相萃取装置;涡旋混合器;水浴超声波清洗仪;0.22µm有机相滤膜。
5、测定步骤:(样品处理过程需注意避光)
(1)样品提取
准确称取配合饲料、精料补充料和浓缩饲料2g,或预混合饲料1g,以及相同质量的基质匹配空白试料,分别于50mL聚丙烯离心管中。加入0.1%甲酸-乙腈溶液10mL,涡动1min,40℃超声10min。9000r/min离心15min,收集上清液。残渣用0.1%甲酸-乙腈溶液10mL重复提取一次,合并两次提取液,混匀,为总提取液。准确量取5mL总提取液于10mL试管中,60℃下氮气吹至约2mL,加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液4mL,充分溶解残留余物,为备用液。
(2)样品净化
取HLB固相萃取柱,依次用3mL甲醇和3mL水活化。取备用液过柱,依次用0.02mol/L盐酸3mL和5%甲醇淋洗。用5mL甲醇洗脱,收集洗脱液,氮气吹干,加入20%乙腈溶液1mL充分溶解,过0.22μm滤膜后供上机测定。
(3)基质匹配标准曲线
称取6个空白饲料,按以上步骤进行样品处理后制得多个1mL空白基质样品溶液,混合均匀。准确移取合适浓度的喹乙醇标准储备液,氮气吹干,用1mL空白基质样品溶液溶解,配制成浓度为25、50、100、200、500、1000μg/mL的标准工作液,过0.22μm滤膜后上机测定,绘制标准曲线。
(4)测定
色谱参考条件:
色谱柱:C18柱,柱长50 mm,内径2. 1 mm,粒度1. 7 µm
流动相:A:0.1%甲酸的乙腈溶液 B:0.1%甲酸的水溶液
流速:0.2mL/min
进样体积:10μL
表1 梯度洗脱程序
序号 | 时间.min | A.% | B.% |
1 | 0 | 88 | 12 |
2 | 1.0 | 88 | 12 |
3 | 2.0 | 50 | 50 |
4 | 3.5 | l2 | 88 |
5 | 4.5 | 88 | 12 |
6 | 5.0 | 88 | 12 |
质谱参考条件:
离子源:电喷雾(ESI)
扫描方式:正离子扫描
检测方式:多反应监测(MRM)
电离电压:2.8KV
源温:80℃
雾化温度:350℃
锥孔气流速:27L/h
雾化器流速:600L/h
表2 定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量
药物名称 | 定性离子对 M/Z | 定量离子对 | 锥孔电压 | 碰撞能量 |
m/ z | v | eV | ||
喹乙醇 | 264>143 | 264>143 | 25 | 30 |
254>212 | 25 | 30 |
(5)定性测定
目标药物选择1个母离子和2个特征离子,在相同试验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在12.5%之内,且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较,偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物。
表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
单位为百分率
相对离子丰度 | >50 | >20~50 | >10~20 | ≤10 |
允许的最大偏差 | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
(6)定量测定
在仪器最佳工作条件下,对基质匹配标准溶液进样,以峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标绘制工作曲线,用单点或多点校正对样品进行定量,样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内 。 上述色谱和质谱条件下,基质匹配标准溶液特征萬子色谱图如下:
(7)结果计算
试样中喹乙醇含量X,以质量分数计,单位为毫克每千克(mg/kg)
A ——试样溶液中对应目标药物的峰面积;
As ——基质匹配标准溶液中对应目标药物的峰面积;
Cs ——基质匹配标准溶液中对应目标药物的浓度,单位为µg/mL;
V ——净化液体积,单位为mL;
M ——样品的质量,单位为g;
V1 ——分取液体积,单位为mL;
V2 ——总提取液体积,单位为mL。
测定结果用平行测定的算数平均值表示,结果保留三位有效数字。
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